Вестник ТГПУ им Л.Н. Толстого №4 2007

№ 4, 2007 ВЕСТНИК ТГПУ им. Л. Н. Толстого центрифуги индивидуальных клетках, не позволявших крысам во время вращения изме­ нять положение тела по отношению к вектору гравитации. Эксперимент проводили при температуре в помещении 22±2 °С и цикле «свет —темнота» 12/12 ч. Крысы получали стандартный корм и воду. На 24-е сутки эксперимента животные декапитировались с по­ мощью гильотины. После декапитации животных мозжечок фиксировали методом погру­ жения и замораживали в жидком азоте по стандартной методике [9]. Инкубацию срезов для определения активности цитохромоксидазы (ЦО) проводили по стандартной методике [9]. ЦО в гистохимических исследованиях играет роль функционального маркера. Активность этой группы ферментов коррелирует с функциональной активностью нейрона, так как эти ферменты локализованы внутри митохондрий и тесно связанны с их структурой [6]. На полученных 15 мкм криостатных срезах методом световой микроскопии исследо­ вались клетки Пуркинье ВЦЦ и нодулуса червя мозжечка. Анализ срезов проводили с помощью исследовательского микроскопа Микмед-2 (ЛОМО, Россия), оснащенного черно-белой телевизионной камерой высокого разреше­ ния WAT-505E (Watec, Япония). Изображение вводили в PC-совместимый компьютер посредством платы видеозахвата FlyVideo EZII. Морфометрический и денситометриче- ский анализ изображения проводили в среде Scion Image 4.0.2 (Scion Corp., 2000). Оцени­ вали площадь поперечного сечения (ППС) клетки, ядра и усредненную относительную величину оптической плотности цитоплазмы (ООП) нейронов, которая в данном случае являлась количественным показателем уровня активности ЦО. Для каждой группы животных было проанализировано не менее 200 нейронов. Срав­ нительный анализ данных производили на основе дисперсионного анализа (ANOVA). Ре­ зультаты исследования представлены средними значениями и стандартными ошибками. Разрешение на проведение эксперимента было дано комиссией ГНЦ РФ ИМБП РАН по биомедицинской этике - физиологической секцией Российского национального коми­ тета по биоэтике. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ Результаты исследования влияния измененной гравитации на клетки Пуркинье в изу­ чаемых структурах мозжечка крыс представлены в табл. 1. В нейронах ВЦД у крыс, находившихся в АНОП, наблюдается достоверное умень­ шение ППС нейронов (порядка 6 %) и ООП цитоплазмы на 13 % по сравнению с живот­ ными виварийного контроля. При этом ППС ядра увеличивается на 15 %. В нейронах ко­ ры нодулуса у животных, находившихся в АНОП, ППС клетки достоверно не меняется (по сравнению с крысами первой группы), но происходит достоверное увеличение ППС ядра, а ООП цитоплазмы уменьшается на 15%. Совокупность перечисленных изменений в целом демонстрирует гипофункциональные изменения в ганглиозных нейронах исследуе­ мых структур мозжечка, развивающиеся вследствие снижения афферентного притока при исключении статической и уменьшении динамической нагрузки на задние конечности. Таблица 1 Параметры клеток Пуркинье ВЦД и нодулуса мозжечка крысы Параметры Группы контроль АНОП АНОП + 2 G ППС клетки (мкм2) ВЦЦ 315.55 ±4.67 297.97 ±4.40* 338.41 ±5.81** нодулус 292.49 ± 4.04 301.36 ± 5.55 304.61 ±9.76 ППС ядра (мкм2) ВЦЦ 71.71 ± 1.30 80.95 ± 1.68* 81.82 ±2.23* нодулус 80.24 ± 1.34 86,66 ± 1.85* 81.36 ±2.67 ООП ВЦЦ 0.360 ±0.002 0.310 ±0.004* 0.340 ±0.004** нодулус 0.340 ± 0.004 0.290 ± 0.004* 0.360 ± 0.003** *Достоверно различающиеся значения по сравнению с контрольной группой (р< 0.05). ** Достоверно различающиеся значения по сравнению с группой АНОП (р < 0.05).